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1、载体构建错误。 这个屡见不鲜,很多克隆新人经常弄错读码框。比如Qiagen的pQE系列载体,其克隆位点常有一两个碱基的区别;另外有些酶产生粘端有些酶产生平端,这些都容易导致读码框错误,从而表达不出来。 2、宿主菌选择不当。不同的宿主菌其基因型是不一样的。有些经过特殊修饰的载体,或者特殊用途的载体,或者有特殊启动子的载体,必须选择合适的宿主菌进行表达。因此,当你的蛋白没有表达出来时,可以考虑更换宿主菌。 3、密码子的使用频率低。有些基因其本身含有许多稀有密码子,尤其是起始密码之后的15个碱基之内的稀有密码子,对蛋白表达有着很重要的影响。优化密码子对原核表达似乎效果很好,对真核表达系统未见得有很好的效果。曾经有某人在毕赤酵母表达某蛋白两年未果,试图将密码子优化进行表达,结果还是没有表达。一气之下将该优化的基因序列克隆到原核表达载体,表达量居然出奇地高!这是一个辛酸的笑话,但是一个真实的故事。但是有一点我可以有很大把握的说:对于真核表达,密码子优化只能起锦上添花的作用(确认有表达,以此来提高表达量),而不能雪中送炭(没有表达出来,通过密码子优化极有可能不奏效)。 4、质粒不稳定或者质粒丢失。pET系统通常比较稳定。但是你选用带氨苄青霉素抗性的载体时,也许有可能产生β-lactamase降解了抗生素,使质粒丢失。还有一种情况是表达重组的毒素蛋白,对宿主细胞...
发布时间: 2018 - 08 - 28
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摘要:  在细胞生物学领域,由于荧光激发与检测对细胞形态及生理的影响较小,因而当之无愧地成为研究细胞结构与功能首选的示踪方法之一。五花八门的细胞器荧光探针是细胞学研究中重要的一种工具,大概有几百种之多。篇幅有限,生物通特意挑选了几个热门的细胞器,介绍一些明星探针。 在细胞生物学领域,由于荧光激发与检测对细胞形态及生理的影响较小,因而当之无愧地成为研究细胞结构与功能首选的示踪方法之一。五花八门的细胞器荧光探针是细胞学研究中重要的一种工具,大概有几百种之多。说到荧光探针,Molecular Probes绝对是一块“谁与争锋”金字招牌,2003年被Invitrogen收归旗下。尽管宣传不多,但分子探针这一块的销售额还是随着细胞学研究的进展而节节攀升。没办法,跟着文献走,文献中尽是它。下面这张漂亮的图上标出的细胞器,Invitrogen都有相应的探针。篇幅有限,生物通特意挑选了几个热门的细胞器,介绍一些明星探针。还有更多精彩等着你来发现。。。线粒体线粒体是细胞的能量工厂。因其参与了细胞凋亡,这些年也成为研究的热门。线粒体的荧光探针主要有:JC-1、Rhodamine 123等,Invitrogen还推出专门的MitoTracker® 系列探针。JC-1是用得最多的。它在浓度或线粒体膜电位低时,以单体存在,激发波长为490 nm,发射波长为527 nm,呈绿色荧光。当浓度...
发布时间: 2018 - 08 - 28
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并非所有的实验室器具都完美无瑕Thermo Scientific™ Nalgene™瓶、细口大瓶和实验室器具树立了优良品质和卓越性能的典范,同时能保护您的宝贵研究。Nalgene容器和塑料材质的实验室器具相比玻璃材质不易损坏或碎裂,在保护您的宝贵工作的同时让您的实验室更加安全。Nalgene 通用实验室器具产品有多种高质量材质、尺寸和配置可选,足以满足用户严苛的应用要求。 我们的产品系列包括:瓶子、细口大瓶、烧杯、离心管、漏斗、罐子、广口瓶和数百种其他产品,便于您进行研究工作。 过滤产品 最难过滤的液体也能快速灭菌过滤。保持无菌性,是对抗污染的最后一道防线。我们的过滤产品包括瓶口过滤器、切割膜片过滤器、过滤装置和针头过滤器。 瓶和附件 树立了卓越品质的典范。我们仅使用符合制药、大学研究、食品和快销品应用中最严格的标准的高质量树脂 质量优异的树脂可以确保溶出物含量低,以免污染瓶内物质。 通用塑料器具 适用于常规应用的高品质实验室器具。我们提供搅拌棒、搅拌杆、量筒、滴定管、培养瓶、漏斗、烧杯以及数百种其它产品,帮助您开展研究。我们的塑料器具具有良好的高压灭菌性以及针对绝大多数实验室试剂出色的化学耐受性,是生命科学实验室应用中玻璃器具的完美替代品。 实验室安全 保持您的实验室有序、安全和整洁。我们的各种实验室收纳用具适合放置丙烯酸Parafilm™、移液器、实验室小型器件以及冷冻液...
发布时间: 2018 - 08 - 21
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几十年来,Thermo Scientific Finnpipette 移液器系统在全球上千所实验室和应用中表现出了无与伦比的工作效率和人体工程学。Finnpipette F1:让我们的移液器助您实现日常工作中的每一个目标符合人体工程学轻巧的手柄设计结合较小的推杆、吸头连接和弹出力有助于减少 RSI 风险安静轻松的无阻尼量程调节体验安静轻松的无阻尼的量程调节新机制,该机制相对于早期型号,可减少 50% 以上的力度。牢固的量程锁定牢固的量程设置可避免操作过程中容量意外变动。仅需向上提升推杆即可设定容量,向下按即可将其锁定到位,毫不费力。舒适可调120° 可调式指托,习惯于右手或左手的操作人员都能舒适使用,这使得在移液间隙手部可以得到放松。超强吹出功能吹出能力增大至 150%,确保高效吹出微量液体,避免在 50 μl 和以下型号中出现毛细管作用。Finntip 移液器吸头选择范围宽泛Finntip 的设计与制造专用于 Finnpipette 型号,以此确保最理想的性能、精确性和准确性。CE 认证Finnpipette F1 移液器与其兼容的 Finntip 吸头根据欧洲 IVD 法令获得 CE 认证。5 年保修期可在线注册,方便快捷,但各个国家可能有所差异。
发布时间: 2018 - 08 - 20
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