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免疫实验的不同表面

日期: 2015-12-03
浏览次数: 249
 

用于ELISA的表面

在整个“夹心法”ELISA实验中,最关键的就是选择合适的表面用于第一层生物分子的结合吸附。高结合力固然重要,但是最重要的参数—检测极限取决于信噪比。在您开始免疫检测实验前,可以使用Nunc三角形(见下图)或者Nunc六边形(见下图)。作为选择最合适表面作为参考指南。除此之外,还要对孵育条件和检测物浓度等参数进行优化,从而达到最好的检测结果。

MaxiSorpTM

Nunc MaxiSorp表面提供亲水和疏水的混合表面,用于蛋白吸附。特别适合用于ELISA检测中lgG的吸附。

MediSorp

MaxiSorp相比,MediSorp总吸附能力稍弱。然而,在很多情况下可以减少血清蛋白带来的非特异性吸附,改善信噪比。如果您还在为ELISA检测中过高的背景阅读问题而烦恼,可以选择MediSorp

Streptavidin(链霉亲合素)

Streptavidin(链霉亲合素)Biotin(生物素)之间相互作用,已被广泛地应用于不同类型的免疫检测中。Nunc提供两种Streptavidin表面。

Streptavidin被动吸附

链霉亲合素分子直接被吸附在聚苯乙烯表面。在很多的应用中都表现良好,尤其对于相对晓得生物素化分子。这是因为,小的分子靠近聚苯乙烯表面而产生的空间位阻较小,对吸附的影响也较小。

Immobilizer Streptavidin

该表面的链霉亲合素分子通过共价结合力与聚苯乙烯表面相连,大概有2nm的间隔。这个间隔带来很多优点:可以减少空间位阻,提供非常稳定的表面,提供可支配的有效结合位点间距。这些都对大的生物素化分子的吸附十分有利。

Immobilizer氨基

ELISA实验中,第一层分子与表面的共价结合有很多优点。氨基表面可以被用来共价结合蛋白(包括抗体)或多肽。如果使用合适的修饰方法,DNA分子也可被结合。当第一层分子结合好后相当地稳定,可以经受剧烈的洗涤步骤。

Immobilizer镍螯合/

Immobilizer谷胱甘肽

Nunc提供两种特殊处理的表面,用于检测和表征融合蛋白,谷胱甘肽表面用于GST-标记的融合蛋白。这些经过特殊处理的板可以用于样品或粗制细胞裂解液的纯化。与Immobilizer家族的其它产品一样,镍螯合的表面与谷胱甘肽表面也具有这些优点:无需活化步骤,低检测限,高信噪比以及低背景(无需封闭)。

CovasLink

CovasLink表面化学通常能够结合其他方法所不能结合的分子。可以被用来作为双功能的连接分子,通过-COOH基团结合多肽,通过5’末端结合DNA分子。而且,整个表面可以用戊二醛来活化。


 

免疫学检测中的应做&不应做

DO

²  使用合适的表面处理

²  检查您的试剂冲突记录、例如缓冲液的错配

²  检查您仪器上所有可能的故障

²  校正您的移液管,并检查精度

²  正确存放您的试剂

²  精确的记录下检测步骤的时间

²  在第一次涂层之后,通过封闭来避免高背景。这样避免出现非特异性结合位点

²  使用加热模块或者水浴槽来均匀地传播热量,这样做可减少边缘效应

²  使用白板时,读数前请将板置于暗处、避光。避免由于产生磷光影响读数

DON’T

²  令孔保持空置,它们会迅速变干导致蛋白质受损

²  使用自动解冻冰箱对试剂进行解冻

²  在自然光线下显色,光度的不同会造成边缘效应

²  在培养器中进行检测

 

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